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紫外分析儀的原理及其應(yīng)用
紫外分析儀是熒光的應(yīng)用，熒光是什么呢? 了解下什么是熒光，熒光又作"螢光"，是種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(zhǎng)的入射光(通常是紫外線或X射線)照射，吸收光能后入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長(zhǎng)長(zhǎng)的出射光(通常波長(zhǎng)在可見(jiàn)光波段);而且旦停止入射光，發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失。具有這種性質(zhì)的出射光就被稱之為熒光。 知道了什么是熒光，顧名思義就能想到什么是熒光。熒光是某些物質(zhì)受定波長(zhǎng)的光激發(fā)后，在短時(shí)間內(nèi)(10-8秒)會(huì)發(fā)射出波長(zhǎng)大于激發(fā)波長(zhǎng)的光，這種光稱為熒光。這發(fā)光現(xiàn)象在各方面的應(yīng)用及有關(guān)的方法稱為熒光(fluorescent technique)。
物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況，種是自發(fā)熒光，如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后，能發(fā)出紅色的熒光，稱為自發(fā)熒光;二種是誘發(fā)熒光，即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過(guò)紫外線照射發(fā)出熒光，稱為誘發(fā)熒光。
熒光在生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究中應(yīng)用主要包括以下幾個(gè)方面:
1、物質(zhì)的定性:不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更的選擇性。
2、定量測(cè)定:利用在較低濃度下熒光強(qiáng)度與樣品濃度成正比這關(guān)系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測(cè)定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測(cè)定的個(gè)優(yōu)點(diǎn)是靈敏度，例如維生素B2的測(cè)定*可達(dá)1毫微克/毫升，這優(yōu)點(diǎn)使測(cè)定時(shí)所需要樣品量大大減少。 這種定量測(cè)定方法還可應(yīng)用于酶催化的反應(yīng)，只要反應(yīng)前后有熒光強(qiáng)度的變化，就可用來(lái)測(cè)定酶的含量及酶反應(yīng)的速率等。
3、研究生物大分子的物理化學(xué)性及其分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象:熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團(tuán)的本身結(jié)構(gòu)有關(guān)，而且還強(qiáng)烈地依賴于發(fā)色團(tuán)周圍的環(huán)境，即對(duì)周圍環(huán)境十分敏感。利用此點(diǎn)可通過(guò)測(cè)定上述有關(guān)熒光參數(shù)的變化來(lái)研究熒光發(fā)色團(tuán)所在位的微環(huán)境的征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(tuán)(如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內(nèi)源熒光)以外，可將些殊的熒光染料分子共價(jià)地結(jié)合或吸附在生物大分子的某位，通過(guò)測(cè)定該染料分子的熒光性變化來(lái)研究生物大分子，這種染料分子被稱為"熒光探針"，它們發(fā)出的熒光般稱為外源熒光。熒光探針的應(yīng)用，大大地開拓了熒光在分子生物學(xué)中的應(yīng)用范圍。
4、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)可以研究生物大分子中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象:通過(guò)該現(xiàn)象的研究，可以獲得生物大分子內(nèi)的許多信息。
以往人們常用熒光偏振做標(biāo)來(lái)研究生物大分子動(dòng)力學(xué)。人們趨于用熒光偏振隨時(shí)間的衰減來(lái)研究這些問(wèn)題。在這種方法中，激發(fā)光不是連續(xù)的面偏振光，而是偏振的光脈沖，因此測(cè)得的F∥和F是在兩個(gè)不同方向上偏振的熒光隨時(shí)間的衰減，它既和熒光壽命τ有關(guān)，又與分子在溶液中的運(yùn)動(dòng)有關(guān)，因此常表示為F∥(t)和F⊥(t)。由它們可得相當(dāng)重要的物理量--各向異性參數(shù)A(t)。由A(t)可推測(cè)生物大分子的形狀、分子轉(zhuǎn)動(dòng)弛豫時(shí)間(即從個(gè)定向的狀態(tài)到個(gè)無(wú)定向狀態(tài)所要的時(shí)間)，而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的轉(zhuǎn)動(dòng)角度和時(shí)間之間的函數(shù)關(guān)系。由這些結(jié)果可以研究分子之間的相互作用、分子間結(jié)合的緊密程度、蛋白質(zhì)、核酸分子的解聚程度等等。
另外，熒光在免疫學(xué)中亦有廣泛的應(yīng)用。重要的就是熒光抗體法。將某些熒光染料與血清抗體相結(jié)合，這種標(biāo)記的抗體仍可地與相應(yīng)抗原發(fā)生結(jié)合，形成的復(fù)合體具有熒光性，從而可以確定抗原或抗體的存在及其含量。
利用熒光的紫外分析儀主要是物質(zhì)的定性方面的應(yīng)用，包括:
⑴在實(shí)驗(yàn)作中檢測(cè)，許多主要物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核苷酸等。
⑵在藥物和研究中，可用來(lái)檢查激素生物堿，維生素等各種能;產(chǎn)生熒光藥量，別適宜作薄層分析和紙層分析斑點(diǎn)和檢測(cè)。
⑶在染料涂料橡膠、石油等化學(xué)行業(yè)中，測(cè)定各種熒光材料，熒光示劑及添加劑，鑒別不同種類的原油和橡膠制品。
⑷紡織化學(xué)纖維中可測(cè)定不同種類的原材料。如羊毛，真絲人纖維，棉花，合成纖維，并可檢查成量。
⑸在糧油，蔬菜，食品，可用于檢查毒素(如黃曲霉素等)，食品添加劑，變質(zhì)的蔬菜、水果、可可豆、巧克力、脂肪、蜂蜜、糖蛋等的質(zhì)量。
⑹在地質(zhì)、考古等，可起到發(fā)現(xiàn)各種礦物質(zhì)，判別文物化石的真?zhèn)巍?/span>
⑺在可檢查紋、測(cè)定密寫字跡等。
三用紫外分析儀用途及適用范圍
△ 在實(shí)驗(yàn)作中它是檢測(cè)許多主要物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核苷酸等。
△ 在藥物和研究中，可用來(lái)檢查激素生物堿，維生素等各種 能產(chǎn)生螢光藥品的質(zhì)量，它別適宜作薄層分析，紙層分析斑點(diǎn)和 檢測(cè)。
△ 在染料涂料橡膠、石油等化學(xué)行業(yè)中，測(cè)定各種螢光材料，螢光示劑及添加劑， 鑒別不同種類的原油和橡膠制品。
△ 在紡織化學(xué)纖維中可以用于測(cè)定不同種類的原材料如羊毛、真絲人纖維、棉花合成纖維，并可檢查成量。
△ 在糧油、蔬菜、食品可用于檢查毒素、(如黃曲霉素等)食品添加劑，變質(zhì)的蔬菜、水果、可可豆肪、巧克力、脂肪、蜂蜜、糖、蛋 00等的質(zhì)量。
△ 在地質(zhì)、考古等可起到發(fā)現(xiàn)各種礦物質(zhì)、判別文物化石的真?zhèn)巍?/span>
△ 在門可檢查痕測(cè)定、密寫字跡等。
折疊三用紫外分析儀產(chǎn)品點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)
1、紫外分析儀(YLN-II型)由紫外線燈管及濾光片組成。UVC 254nm波長(zhǎng)， UVA 365nm波長(zhǎng)， 兩種波長(zhǎng)可想互立使用，并具有點(diǎn)樣能。
2、紫外分析儀(YLN-II型)具有消耗率小，熱量低，可以長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)使用，大的優(yōu)點(diǎn)是可以隨開隨關(guān)開即可使用，十分方便。
3、紫外分析儀(YLN-II型)紫外燈燈管發(fā)出的光經(jīng)濾光片濾去可見(jiàn)光，從而為熒光分析提供了強(qiáng)烈的254nm和365nm紫外光。
4、在暗室里，可以通過(guò)儀器的點(diǎn)樣能，粗略估計(jì)樣品之間的距離。
折疊三用紫外分析儀標(biāo)
△ 電源:220V,50HZ.
△ 率:25 W.
△ 紫外線波長(zhǎng):254nm、365nm.
△ 外形尺寸:270×270×300mm.
△ 濾色片:200×50mm
△ 重量:約3 Kg
三用紫外分析儀作原理
采用不同波長(zhǎng)的紫外光對(duì)DNA、RNA電泳凝膠樣品行觀察拍照、檢測(cè)蛋白質(zhì)、核甘酸、，適用于核酸電泳分析、檢測(cè)，PCR產(chǎn)物檢測(cè)，DNA紋圖譜分析，紙層分析或薄層分析等。適用于核酸電泳、熒光的分析、檢測(cè)， PCR 產(chǎn)物檢測(cè)， DNA 紋圖譜分析，是開展 RFLP 研究， RAPD 產(chǎn)物分析的理想儀器。本機(jī)在暗室操作，便可對(duì)電泳凝膠行紫外觀察和照相，也可配備蛋白檢測(cè)儀對(duì)蛋白行觀察和照相。紫外強(qiáng)而均勻。可接反射燈等。此產(chǎn)品多次出口。
三用紫外分析儀的使用方法:該儀器設(shè)置三個(gè)開關(guān)鍵，分別控制點(diǎn)樣燈，254nm和365nm紫外燈，且相互立，當(dāng)需要某燈作時(shí)，按下相應(yīng)開關(guān)鍵即可。
